Histologie, Immunomarquage & Transparisation
La plateforme d'histologie du C3M à été crée en 2013, grâce au financement du Canceropôle PACA qui à permis l’achat d’équipements de pointe. Cette plateforme de préparation histologique est équipée pour enrober des tissus en paraffine, couper des blocs de paraffine ou des tissus congelés, transpariser des tissus et réaliser des immuno-marquages ainsi que des colorations histologiques de manière automatisée. Les missions de la plateforme HistoC3M sont multiples : entretien des appareils, formation théorique des utilisateurs aux approches d'histologie classiques (cryostat, paraffine…) et innovantes (transparisation), formation pratique des utilisateurs à l’utilisation des appareils de la plateforme, conseils scientifiques et techniques, veille technologique, innovation et développment...
Directeur scientifique Jérome GILLERON
Veuillez me contacter si vous avez des questions sur le fonctionnement
ou les possibilités techniques de la plateforme.Tél: 04 89 15 38 31
Jerome.GILLERON@univ-cotedazur.fr
Pour accéder à la plateforme, les utilisateurs doivent avoir été formés par le personnel de la plateforme et signer la charte utilisateur. Les utilisateurs doivent se réserver pour chaque appareil sur l’intranet du C3M. La plateforme mutualise l’achat des solvants et colorants classiques, de la paraffine, des couteaux à usage unique et des lames de verre superfrost plus. Le reste est à la charge des utilisateurs.
Comme stipulé dans la charte, les publications contenant des données générées sur la plateforme doivent mentionner dans les remerciements : « Histology analyses were performed at HistoC3M, a histology facility fully equipped by fundings from the Canceropole PACA ».
La coloration à l'hématoxyline et à l'éosine (coloration HE) est une technique de coloration d'usage courant en histologie et en histopathologie.
Le Oil Red O est un colorant utilisé pour visualiser les triglycérides neutres et les lipides.
L’immunofluorescence est une technique de marquage qui utilise des anticorps couplés à des fluorochromes.
Le STP120 Spin Tissue Processor est un automate permettant d’enrober jusqu’à 100 cassettes en même temps de manière automatisée. Les tissus fixés et mis en cassettes sont déshydratés par des bains croissant d’alcool (70, 80, 95 et 100%), puis l’alcool est substitué par un solvant avec un meilleur pouvoir d’échange, le xylène. Enfin les tissus sont incubés avec de la paraffine chaude qui infiltre les tissus. Les tissus sont ensuite inclus à l’aide du Modular Tissue Embedding Center EC 350.
Le Modular Tissue Embedding Center EC 350 est un distributeur de paraffine chaude utilisé pour inclure les tissus enrobés de paraffine par le STP120. Les tissus sont extraits des cassettes, placés dans un moule qui est ensuite rempli de paraffine et est monté en bloc avec la partie basse de la cassette. Les blocs figent ensuite sur une plaque froide associée au système.
Le Microtome Microme HM340E, est un microtome équipé du système Niagara qui permet de collecter directement les coupes en paraffine dans un bain d’eau chaude. Ce système permet des coupes préservant fidèlement la structure des tissus mais aussi une plus grande simplicité de coupe pour les utilisateurs ponctuels. Ce microtome permet de couper des sections de tissu inclus dans la paraffine d’environ 1 à 25 µm d’épaisseur qui pourront être utilisées pour les colorations histologiques et/ou les analyses par immuno-marquage (bien que les coupes congelées soient plus adaptées à l’immuno-marquage).
Le PT antigen retrieval module permet de chauffer des solutions dans lesquels sont plongés les échantillons pour tenter de récupérer une partie de l’antigénicité des coupes de tissus en paraffine. Les solutions utilisées sont le tampon citrate pH6 et le Tris-EDTA pH9.
L’automate d’immuno-marquage, Auto-Immunostainer Labvision 350, permet de marquer de manière automatisée les coupes de tissus en paraffine et/ou congelée de manière simple, efficace et reproductible.
L’autostainer Myreva permet de réaliser de manière simultanée et automatisée les colorations histologiques classiques sur des séries importantes de lames. Les colorations classiquement utilisées sont l’Hématoxyline/Eosine, l’Oil-Red-O et le bleu alcian, mais toute nouvelle coloration peut être ajoutée sur demande par e-mail auprès des responsables de la plateforme.
Le Cryostat CM350 permet de réaliser des coupes de tissus enrobés dans l’OCT (ou tissue Tek) et congelés. Les coupes réalisées entre -14°C et -55°C (selon les tissus) préservent de manière optimales les antigènes des tissus. La morphologie des tissus est moins bonne que dans les coupes en paraffine mais reste très acceptable.
| Académique | Privé | |
|---|---|---|
| Utilisation des appareils (par heure - 1h minimum) | 77€ | 100€ |
| Formation obligatoire par appareil utilisé | 50€ | 100€ |
| Formation théorique histologie (1h30) | 50€ | 100€ |
Tout ce que vous avez toujours voulu savoir sur les colorations histologiques et les immuno-marquages sans jamais oser le demander : de la préparation d’échantillons à l’observation.
La plateforme HistoC3M à développé une technologie de transparisation des tissus et un pipeline d’imageries et d’analyses dédiées. Pour en savoir plus, veuillez contacter le responsable scientifique de la plateforme HistoC3M.
