Cytométrie et tri cellulaire
La plateforme de cytométrie en flux du Centre Méditerranéen de Médecine Moléculaire (FC3M) met à la disposition de la communauté scientifique une large gamme de cytomètres offrant de multiples approches analytiques. L’objectif de notre plateforme est d’accompagner les chercheurs en leur apportant une expertise, une assistance technique et des outils de pointe. Elle est accessible aux utilisateurs internes (toutes les équipes du C3M) et externes (industriels et académiques). Trois ingénieurs assurent le bon fonctionnement de la plateforme avec pour fonction ; la formation aux différents instruments d'analyse, la maintenance quotidienne des instruments, l’aide à l'analyse des données, ainsi que la conception expérimentale et l'assistance au tri cellulaire. A ces équipements et cette activité de service est associée une activité de développement technologique en cytométrie en flux mettant à la disposition des utilisateurs de nouvelles approches analytiques.
La plateforme cytométrie du C3M est constituée de 5 cytomètres (3 cytomètres analyseurs conventionnels et 2 cytomètres spectraux, dont 1 trieur de cellules).
Le réseau Microscopie Imagerie Cytométrie Azur
La plateforme cytométrie du C3M est labellisée Infrastructure en Biologie Santé et Agronomie (IBiSA). Elle est membre du réseau Microscopie Imagerie Cytomètrie Azur (MICA) qui mutualise les plateaux techniques (microscopie photonique, électronique, cytométrie, analyse d'images) de 8 partenaires en recherche académique sur la Côte d'Azur.
Responsables cytométrie et tri cellulaire
Responsable équipement BD Biosciences - Cytek et tri cellulaire : Frédéric LARBRET
Responsable équipement Miltenyi Biotec : Marielle NEBOUT
Suppléante Tri cellulaire : Coline SAVY
N'hésitez pas à nous contacter si vous avez des questions sur le fonctionnement
ou les possibilités techniques de la plateforme.
L'Aurora de Cytek est un cytomètre spectral équipé de 5 lasers (355 nm, 405 nm, 488 nm, 560 nm et 633 nm) et de 54 détecteurs.
La technologie spectrale permet d’utiliser simultanément des fluorochromes présentant des maximums d’émission très proches tel que l’APC et l’Alexa Fluor 647 à des longueurs d’onde d’excitation identiques. Cet appareil est équipé d’un passeur de plaque 96 à 384 puits.
Le cytomètre MACSQuant MQ10 Analyser est équipé de 3 lasers air-cooled Coherent décalés dans l’espace et de 10 paramètres optiques :
FSC et SSC avec PMT et 8 Fluorescences
- 2 PMT sur le laser Violet 405 nm (Diode laser 405 nm, puissance 40mW)
- 4 PMT sur le laser Bleu 488 nm (Diode Pumped Solid-State (DPSS) laser Sapphire 488 nm, puissance 30mW)
- 2 PMT sur le Laser Rouge 635 nm (Diode laser 635 nm, puissance 20mW)
Il possède un passeur de plaque pour automatiser l'acquisition en plaque 96 puits.
Le cytomètre MACSQuant VYB Analyser est équipé de 3 lasers air-cooled Coherent décalés dans l’espace et de 10 paramètres optiques :
FSC et SSC avec PMT et 8 Fluorescences
- 2 PMT sur le laser Violet 405 nm (Diode laser 405 nm, puissance 40mW)
- 2 PMT sur le laser Bleu 488 nm (Diode laser Sapphire 488 nm, puissance 50mW)
- 4 PMT sur le Laser jaune 561 nm (Diode Pumped Solid-State (DPSS) laser Sapphire 561 nm, puissance 100mW)
Il possède un passeur de plaque pour automatiser l'acquisition en plaque 96 puits.
Le cytomètre MACSquant Analyser est équipé de 3 lasers air-cooled Coherent décalés dans l’espace et de 9 paramètres optiques :
FSC et SSC avec PMT et 7 Fluorescences
- 1 PMT sur le laser Violet 405 nm (Diode laser 405 nm, puissance 40mW)
- 3 PMT sur le laser Bleu 488 nm (Diode Pumped Solid-State (DPSS) laser Sapphire 488 nm, puissance 30mW)
- 2 PMT sur le Laser Rouge 635 nm (Diode laser 635 nm, puissance 20mW).
Il possède un passeur de plaque pour automatiser l'acquisition en plaque 96 puits.
Le BD FACSCanto II est équipé de 3 lasers 405 nm, 488 nm et 633 nm et de 8 détecteurs. Il est équipé d’un carrousel qui permet d'automatiser l’aquisition jusqu’à 48 tubes.
Configuration FACSCANTO II
Le trieur cellulaire spectral Aurora Cell Sorter (CS) de Cytek est équipé de 4 lasers (405nm, 488nm, 561nm et 633nm) et de 48 détecteurs. Il permet de réaliser des tris à partir d’analyses spectrales et de sélectionner simultanément jusqu’à 6 populations différentes. Les tris peuvent également être réalisés en plaque 96 puits. Installé sous une hotte à flux laminaire, il garantit la stérilité des échantillons et une protection biologique de niveau 2 des utilisateurs. L’utilisation de cet appareil est conditionnée par une prise de rendez-vous avec F. Larbret.
Configuration Aurora CS
L'autoMACS Pro Separator est un automate de séparation cellulaire magnétique qui a été développé pour isoler des sous populations spécifiques de cellules à partir de populations largement hétérogènes.
Le système permet de faire des séparations positives et des déplétions de cellules sans affecter leur fonction et leur viabilité.
Le MACS Pick Up est un réfrigérateur intelligent qui permet de disposer dans le centre d'un stock de réactifs Miltenyi Biotec entre +2°C et +8°C.
Grâce à votre badge d'équipe, vous pouvez retirer à tout moment n'importe quel produit du MACS Pick Up. Chaque semaine, des produits sont automatiquement envoyés pour réapprovisionner nos stocks. Les facturations seront automatisées via votre gestionnaire.
Vous pouvez consulter la liste des produits présents dans le MACS Pick Up du C3M.
MACS PICK UPPour accéder à la plateforme, les utilisateurs doivent avoir été formés par le personnel de la plateforme et signer le règlement intérieur. Les utilisateurs doivent se réserver pour chaque appareil sur l’intranet du C3M. La plateforme mutualise l’achat des réactifs classiques et l’utilisation des cytomètres et trieurs cellulaires est soumise à une tarification trimestrielle.
Comme stipulé dans le règlement, les publications contenant des données générées sur la plateforme doivent mentionner dans les remerciements : « Samples acquisition and data analysis were performed on the C3M Cytometry Core Facility financed by Conseil Général CG06 and Conseil Régional PACA ».
Nous encourageons tous les utilisateurs à participer aux formations suivantes dont nous sommes partenaires :
- La cytométrie en flux : Formation de 3 jours «initiation à la cytométrie en flux». Formation théorique et pratique.
- La cytométrie en flux spectrale : Formation de 2 jours «initiation à la cytométrie en flux spectrale». Formation théorique et pratique.
Pour en savoir plus, contacter Frédéric LARBRET
Pour les étudiants en Doctorat à l’Université de Nice côte d’Azur :
- Introduction à la cytométrie en flux En savoir plus
